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鼠尾膠原蛋白I型 Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 產(chǎn)品別名:I型鼠尾膠原蛋白,Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 產(chǎn)品型號(hào):C20-200110 產(chǎn)品包裝:10mg/2ml 產(chǎn)品品牌:Perfemiker,大量現(xiàn)貨,上海秒發(fā)
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產(chǎn)品別名:Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 產(chǎn)品型號(hào):C20-200110 產(chǎn)品包裝:10mg/2ml 產(chǎn)品品牌:Perfemiker 產(chǎn)品描述:溶解于 0.006mol/L HAc,無(wú)菌溶液。 運(yùn)輸和保存方法 冰袋運(yùn)輸。4℃保存,有效期1年。不可凍存。 產(chǎn)品介紹: 膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟器官外基質(zhì)的主要成分,但在皮膚、肌腱、骨骼中分布*為廣泛。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),被廣泛用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),如肝細(xì)胞、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié)、雪旺氏細(xì)胞等。另外,I型膠原蛋白在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。 博飛美科的鼠尾膠原蛋白I型 (rat tailtendon collagen type I) 是通過(guò)Birkedal-Hansen 的方法,通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿 ,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞、培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。 也可用于制備三維膠 ,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境 ,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng) 。 Perfemiker鼠尾膠原蛋白包被的 培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)的 PC-12 細(xì)胞 Perfemiker鼠尾膠原蛋白三維膠中 生長(zhǎng)的 NIH-3T3 細(xì)胞(接種后 5天) 和Sigma鼠尾膠原蛋白(cat# C7661) SDS-PAGE 電泳對(duì)比。 A: Sigma B:Perfemiker 使用方法1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2 以包被濃度為 2 ug/cm2 為例: 用無(wú)菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中:
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表面積(cm2 ,每孔或每皿) |
加入 0.012mg/ml 膠原的體積 ( ul ) |
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 |
0.3 |
50 |
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板 |
1.9 |
300 |
12孔細(xì)胞培養(yǎng)板 |
3.8 |
600 |
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板 |
9.5 |
1580 |
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 |
8 |
1330 |
60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 |
21 |
3500 |
100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 |
55 |
9170 |
確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時(shí)后,用PBS洗3-4次后直接使用。 包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。 2、三維膠原的制備 Perfemiker鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。生友膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過(guò)程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。 需要的溶液 ( 均需要 無(wú)菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水 A.不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。 B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200ul Perfemiker鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 使用注意事項(xiàng): 鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠 ,在操作過(guò)程中要盡量保持低溫 。 |